[00953848]杜氏利什曼原虫、霍乱弧菌基因工程双价疫苗的研究

1. 主要研究成果（1）不同群型霍乱弧菌的toxR、toxS、toxT基因分布不同，霍乱弧菌569B是toxS基因的缺失株，其高产毒的特性可能与toxS基因缺失有关。（2）构建霍乱弧菌toxR基因缺失株，通过对toxR基因缺失株和其原出发菌株的比较发现；toxR基因是霍乱肠毒素基因表达的正后向调控基因，是霍乱弧菌主要外膜蛋白ompU（40kda）编码基因表达的反向调控基因。（3）构建自杀性质粒PtoxR-GP63，通过接合转移试验将L.d保护性抗原基因GP63同源重组在霍乱弧菌减毒株IEM101染色体toxR基因位点上，通过破坏toxR基因读码框架以灭活toxR基因有助于降低霍乱弧菌IEM101的残余毒力，并防止其回复毒性，在此基础上我们构建了霍乱弧菌自杀性粒P toxR-GP63，并将L.d保护性抗原基因GP63同源重组在霍乱弧菌减毒株IEM101染色体toxR基因位点上，从而获得既抗利什曼原虫，又抗霍乱弧菌的基因工程双价口服活疫苗侯选株，初步检测结果证实，该疫苗候选株对霍乱弧菌，利什曼原虫均有一定的免疫保护性和免疫原性，能很好地在肠道定居。该疫苗的构建，为进一步深入研究和开发奠定基础。我们的研究工作在美国《Experimental Biology》99年会上交流，深受国外同行的好评。