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[00894688]抗逆相关转录因子在单子叶植物中的表达研究

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技术详细介绍

干旱、低温等逆境是影响植物生长和作物产量的主要限制因素。本研究从小麦基因组扩增单子叶植物逆境诱导表达启动子P-WCS120,测序证明包括1个碱基的替代突变和21个碱基的插入突变,与原序列有3%的非同源性,被GENBANK认定为新发现序列,现已登记注册。用该启动子与抗逆相关转录因子基因(DREB)和潮霉素磷酸转移酶标记基因(hpt)一起,构建成单子叶植物诱导表达载体pC1300WDREB。另用玉米泛素启动子(Ubiquitin),与超氧化物歧化酶基因(MnSOD)和潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)一起,构建成单子叶植物高效表达载体pC1300SOD。通过对N6培养基成分和培养条件的筛选改进,用玉米优良自交系建立了遗传性稳定的高效转基因受体系统,在一定程度上改变玉米转基因受体系统仅依赖于少数几个模式自交系的局面。用pC1300WDREB质粒和pC1300SOD质粒,基因枪法分别转化玉米胚性愈伤组织,获得可育阳性植株。特异PCR、Southern杂交、表达酶活性检测和转基因后代株系的抗氧化能力检测,证明外源基因已经整合到玉米基因组中,并且在逆境条件下过量表达,提高了玉米的抗逆性。
干旱、低温等逆境是影响植物生长和作物产量的主要限制因素。本研究从小麦基因组扩增单子叶植物逆境诱导表达启动子P-WCS120,测序证明包括1个碱基的替代突变和21个碱基的插入突变,与原序列有3%的非同源性,被GENBANK认定为新发现序列,现已登记注册。用该启动子与抗逆相关转录因子基因(DREB)和潮霉素磷酸转移酶标记基因(hpt)一起,构建成单子叶植物诱导表达载体pC1300WDREB。另用玉米泛素启动子(Ubiquitin),与超氧化物歧化酶基因(MnSOD)和潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)一起,构建成单子叶植物高效表达载体pC1300SOD。通过对N6培养基成分和培养条件的筛选改进,用玉米优良自交系建立了遗传性稳定的高效转基因受体系统,在一定程度上改变玉米转基因受体系统仅依赖于少数几个模式自交系的局面。用pC1300WDREB质粒和pC1300SOD质粒,基因枪法分别转化玉米胚性愈伤组织,获得可育阳性植株。特异PCR、Southern杂交、表达酶活性检测和转基因后代株系的抗氧化能力检测,证明外源基因已经整合到玉米基因组中,并且在逆境条件下过量表达,提高了玉米的抗逆性。

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