[00875458]环介导等温扩增技术检测食品中大肠杆菌O157的研究

根据大肠杆菌O157:H7的rfbE序列设计引物，选择最佳的引物比例等条件，建立LAMP检测体系；选择3株大肠杆菌O157和16株其它肠道致病菌，验证LAMP引物的特异性；通过肉眼观察白色焦磷酸镁沉淀及电泳梯形条带，判断LAMP反应的发生；用试剂盒法提取DNA作为模板，进行LAMP和PCR灵敏度的试验；分别用普通热裂解法、酚-氯仿抽提法、试剂盒法提取人工污染食品中的DNA，比较不同提取方法的效果；用试剂盒法提取人工污染食品中大肠杆菌O157:H7基因组DNA，确定并比较LAMP法和PCR法的检出限。创新性该研究利用环介导等温扩增技术(LAMP)检测大肠杆菌O157，通过可视化沉淀观察结果，灵敏度达到1.4 CFU/mL。由于O157:H7毒力强、致病剂量低，并能导致严重的并发症，病死率高，但仍没有供人使用的疫苗以及一旦爆发流行将给人民日常生产生活带来极大的危险性。相对于传统方法和PCR技术，LAMP技术具有高特异性、高灵敏度、耗时短、适宜基层推广等诸多优点，是理想的现代基因检测方法。