[00828582]紫杉醇产生菌现代分子生物学选育及发酵工艺的研究
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技术详细介绍
主要研究内容如下：1)在多途径、多因子、多层次、交叉或重复的连续常规育种的基础上，采用原生质体诱变与融合技术筛选高产紫杉醇菌株；首次应用基因组重排(Genomeshuffling)技术选育紫杉醇高产工程菌株,建立了一整套适合于产生紫杉醇真菌和次生代谢产物合成菌的现代分子生物学育种体系；2)采用DDRT-PCR技术、SSH等技术分别构建了紫杉醇产生菌的差显基因文库、SSH基因文库、高比例全长cDNA文库等3个基因文库，并筛选获得了一批由微生物合成紫杉醇关键酶的基因；3)采用ATMT方法介导首次建立高产紫杉醇的菌种高效遗传转化系统，并构建转化子库，筛选紫杉醇产量发生变化的突变子；以上工作为基因功能、代谢调控、紫杉醇产生菌代谢组学的研究以及高产基因工程菌株的构建奠定了理论基础；4)制备了抗紫杉醇McAb并首次应用于中试中提取紫杉醇，提高了紫杉醇的收率；5)进行了紫杉醇工程菌株的系统发酵条件、发酵工艺的研究，在300L中试发酵中紫杉醇产量高达559.09μg/L。