[00783415]猪干细胞转基因胚胎克隆后的体内外发育

通过该项目的实施，共采集35头妊娠24～26d母猪怀孕子宫，采集胚胎，分离生殖嵴，再分离原生殖细胞（PGC）；按我们已报道的方法，共分离猪胚胎生殖（EG）细胞系11个，建成6个猪转基因EG（EG-EGFP）细胞系。从1312只猪卵巢回收卵母细胞11675枚，选择719枚排出第一极体（pbI）的体外成熟卵母细胞进行转基因干细胞核移植，卵母细胞去核率为66.7%（8/12）；共注射卵母细胞572枚，融合率为67.2％；384枚重构胚经培养后获得7枚重构胚发育。由于发育的重构胚数量不足，未能按计划进行胚胎移植试验。为了检验EG细胞掺合到宿主胚胎内细胞团（ICM）的能力，共对135枚猪胚胎注射EG-EGFP细胞，观察其注射后的发育分布情况。我们的研究工作基本上是按计划进行的，该项目共获得6个猪转基因干细胞系，正式发表论文4篇，其中1篇为SCI收录论文；接受与待发表论文2篇，已投稿论文4篇；资助参加学术会议5次，提交会议论文5篇，大会特邀报告与分组报告各1次；已资助1名硕士研究生毕业。建议基金委能适当增加资助力度，继续资助干细胞转基因克隆、干细胞定向分化和干细胞治疗等方面的研究。