[00729866]医药级植物源重组人血清白蛋白制备技术

人血清白蛋白(HSA)是我国一线大宗临床用药，市场需求420吨/年以上，全部从血浆提取，我国自主供应只能满足市场需求的1/4,进口已经超过60%，被国家列为重大战略需求。自1987年以来，国际上试图利用重组DNA技术替代血源人血清白蛋白，因重组人血清白蛋白计量大，安全性对纯度要求高、且工艺复杂以及痕迹量残留宿主杂质检测等难关，没能进入临床应用。因此，临床级重组人血清白蛋白制备技术具有巨大挑战。该发明的医药级植物源重组人血清白蛋白(OsrHSA)制备技术为国内首创、国际领先。经实施证明：该制备技术的工艺简单，批间质量一致性好，成本低，各项质量标准均满足或高于《中国药典》2015版人血清白蛋白项下的标准,于2017年4月28日批准进入临床研究。 主要发明与创新点如下： 1、突破了国际上医药级重组人血清白蛋白制备的关键制备技术。针对医药级重组人血清白蛋白要求高纯度和制备工艺复杂的问题，根据水稻储藏蛋白疏水性与人血清白蛋白的理化性质差异，发明了复合阳离子-复合阴离子和疏水性层析组合，有效地去除宿主蛋白和OsrHSA多聚体与降解片段；宿主蛋白残留控制在1.5μg/g(1.5ppm)以下,比ICH对重组蛋白的宿主杂质(<100ppm)的要求低66.7倍，折算纯度大于99.999%；人血清白蛋白回收率达到37.5%,建立了工艺简单和规模化容易的制备技术。 2、攻克了从重组人血清白蛋白去除结合内毒素的技术难关。针对人血清白蛋内可结合内毒素特性，利用内毒素的脂溶性特性，发明了在层析步骤中增加10%和15%的有机溶剂的洗杂步骤，既能有效地去除结合在人血清白蛋白的内毒素,又不破坏人血清白蛋内的结构与功能，最终内毒素含里低于0.0083EU/ml,无热源反应，达到《中国药典》2015版的人血清白蛋白项下的内毒素标准。 3、首次在国内建立了工艺特异性宿主杂质检测的关键技术。针对在高浓度的OsrHSA产品中如何检测宿主痕迹量残留核酸和蛋白的技术难题，发明了利用水稻5S核糖体基因作为内标物，建立了荧光定量实时PCR检测宿主残留核酸的高灵敏方法；发明了双叫、多重的亲和层析，建立了工艺特异性的痕迹量残留宿主蛋白的高灵敏的ELISA方法。两种检测技术通过湖北省药品检定研究院的第三方验证和中国食品药品检定研究院的复核，成为国家质量标准。 获得专利授权8项，其中国际专利授权7项。发表SCI论文13篇。该项目于2012年开始应用，2014年已形成年产1吨OsrHSA生产规模。实施该发明生产的OsrHSA在药学、药理、毒理和药代动力学与血源人血清白蛋白一致；肝硬化腹水与失血性休克模型的药效与血源人血清白蛋白等同。由该发明技术制备的OsrHSA安全、有效和质量可控，2017年国家食品药品监督管理总局批准进入临床研究。该发明技术应用从2013年1月至2017年12月，累计产生经济效益为人民币735.45万元。近三年产生经济效益达人民币523.42万元。