[00722723]血红蛋白基因在金霉素产生中的克隆与表达
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技术详细介绍
该项研究将透明颤菌血红蛋白基因（vhb）转入金霉素高产菌株金色链霉菌，改善其限氧条件下的发酵特性。1、优化筛选了F-21原先质体制备、原生质体再生和质粒转化条件。2、构建了大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pIJ699-pUC19-vhb（约1.9kb）和PBR322-pIJ702-Ptet-vhb穿梭质粒（约11kb）；成功转化大肠杆菌JM109和F-21，分别用氨苄青霉素（amp）和硫链丝菌素（tsr）筛选克隆子。对前者发现存在三类克隆子，第三类克隆子被证明为成功克隆子对后者发现在正常供氧条件下性能明显优于受氧限调控的天然启动子。4、发酵特性研究表明Ptet-vhb的工程菌在正常供氧（DO＞30%、空气饱和）时，vhb的表达提高了发酵效率。5、碳代谢流分布特性研究表明工程菌胞 vhb的表达有助于提高目标产物得率。6、工程菌的中试实验结果表明节能效果显著。