[00717545]猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学与免疫防控新技术

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是近年来我国新出现的重要病原，严重危害世界养猪业发展。本项目研究成果主要包括：（1）PRRSV分子流行病学研究：通过流行病学调查、68个分离株鉴定、两个不同毒力分离株全基因序列分析和34个流行株ORF5基因序列分析，证明2002～2008年华东地区规模化猪场PRRSV有两基因亚型和5种GP5糖基化位点变化类型，揭示PRRSV存在多基因变异和自然重组现象，为揭示PRRSV抗原变异和毒力基因提供了有益数据。（2）PRRSV主要结构蛋白免疫特性研究：探明减毒鼠伤寒沙门氏菌可以有效介导GP5基因口服免疫，GP3具有CTL细胞免疫反应特性；GP5信号肽序列、糖基化位点、M、GP3和GP4均能改变GP5中和抗原免疫特性；热休克蛋白70（HSP70）和猪集落细胞刺激因子（GM-CSF）等新型免疫佐剂分子可以明显提高GP3/GP5体液免疫和细胞免疫水平，并有效提供免疫保护作用，为发展PRRSV新型疫苗奠定了基础。（3）新型诊断技术研究：构建获得了PPRSV不同重组蛋白，研究制备了12株单克隆抗体，建立了重组N蛋白-ELISA和重组NSP7蛋白-ELISA抗体检测方法及其试剂盒，研究建立了针对美洲型PRRSV不同靶基因的Nest-PCR、RT-PCR、RT-PCR-RFLP、实时荧光定量PCR等方法，研究建立了高致病性PRRSV RT-PCR鉴别诊断方法和欧洲型PRRSV鉴别诊断方法，均具有较高的敏感性和特异性，为PRRSV诊断和实验室检测提供了有用工具。（4）PRRSV活疫苗研究与开发：从我国健康猪群分离获得一株美洲型PRRSV自然弱毒R98株，经病毒生物学、血清学和分子生物学、疫苗安全性、免疫效力、最小免疫剂量、免疫抗体产生规律、免疫期和保存期等系统研究，研制成功PRRS活疫苗（R98株），获得农业部新兽药注册证书。（5）PRRSV不同靶向shRNA筛选与抑制病毒复制效应研究：成功设计靶向ORF1、ORF5和ORF7的12个小RNA干扰分子，探明靶向ORF1、ORF5和ORF7不同区域均存在RNA 干扰基序；构建表达shRNA的重组腺病毒，探明其体外可以明显抑制靶基因mRNA转录、蛋白质合成和PRRSV复制，抑制高致病性PRRSV在猪体内复制，明显降低其临床致病作用。该项目发表研究论文71篇，其中SCI论文17篇，申请发明专利5项，其中1项获得授权；获国家新兽药注册证书1份。PRRS活疫苗（R98株）实现产业化生产，近两年来在全国推广使用2480万头份，新增产值5378万元，挽回经济损失16.38亿元，经济效益和社会效益十分显著。