[00347564]高效基因克隆技术
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非专利
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技术详细介绍
该成果构建的克隆载体经特定的限制性内切酶酶切后,产生的粘性末端能与Sau3AI(或Sau3AI的同尾酶)部分酶切的基因组片段补加一个碱基dGTP后的粘性末端匹配,可有效地构建基因组文库,也能克隆PCR产物。该技术选用的限制性内切酶可以是EarI和SapI中的任一种。使用该载体克隆PCR产物时需在PCR引物的5’端额外引进Sau3AI酶切位点,在dGTP存在的条件下,利用T4DNA聚合酶的3’~5’切酶活性消化,即能产生与载体双酶切得到的粘性末端匹配的末端,因而也能有效地克隆PCR产物。
该成果构建的克隆载体经特定的限制性内切酶酶切后,产生的粘性末端能与Sau3AI(或Sau3AI的同尾酶)部分酶切的基因组片段补加一个碱基dGTP后的粘性末端匹配,可有效地构建基因组文库,也能克隆PCR产物。该技术选用的限制性内切酶可以是EarI和SapI中的任一种。使用该载体克隆PCR产物时需在PCR引物的5’端额外引进Sau3AI酶切位点,在dGTP存在的条件下,利用T4DNA聚合酶的3’~5’切酶活性消化,即能产生与载体双酶切得到的粘性末端匹配的末端,因而也能有效地克隆PCR产物。