[00328623]酶蛋白的快速纯化方案

　　酶的生产，分离纯化和催化应用过程普遍缺乏集成化的方法。本项目通过构建ELPs&GB双标签重组酶，降低酶制剂的生产和应用成本，提高酶制剂的稳定性。该技术在保证了酶的正常催化活性的基础上，增加了以下功能：

　　1）利用酶工程的手段，通过全基因合成重组质粒，并利用原核表达技术使得重组酶在导入了重组质粒的大肠杆菌体内快速大量表达；

　　2）纯化过程简单快速：利用ELP标签的温度响应行为，实现酶的一步快速ITC分离纯化，整个纯化过程仅需要40 min；

　　3）纯化效果好：和传统的硫酸铵沉淀法相比，该方法纯化的重组酶具有较高的回收率和纯度；

　　4）和色谱纯化技术相比，该方法成本低，操作简单，可规模化生产；

　　5）利用重组酶上的GB标签可以实现重组酶的快速固定化，固定化过程仅需要10 min即可达到吸附平衡；

　　6）固定化成本低，可以用廉价易得的疏水性碳材料作为载体；

　　7）固定化效果好：固载量高，可以明显提高酶的重复使用性，热稳定性及储藏稳定性。

　　性能指标

　　1）一次ITC最大纯化酶活回收率： 97。2%；最高纯化倍数：18。7；

　　2）ITC纯化加热段最少振荡时间：5min，冷却段最少振荡时间：30 min；

　　3）固定化最小振荡时间：10 min；

　　4）GO固定化重组酶最高固载量：698。2 mg/g；

　　5）8次循环催化后剩余的最高酶活：80。2%；

　　6）4℃储存30天后剩余的最高酶活：47。7%。

　　所处阶段

　　目前已经表达并纯化出较高纯度及回收率的重组酶，并应用在酶的固定化实验中。

　　应用范围

　　适用于大多数酶和蛋白质的分离纯化过程，利用酶工程可以获得快速大量的表达的酶；通过简便的ITC可以得到较高回收率和纯度的酶，降低酶的生产成本。有较好的应用前景，特别适合那些较难从天然产物中获得的酶和蛋白质，通过这种方法可以快速，低成本制得所需的酶。