[00326736]组成型壳聚糖酶产生菌的选育及应用
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技术详细介绍
壳聚糖是氨基葡萄糖和N-乙酰氨基葡萄糖的聚合物。其降解产物具有无毒性、生物相容性和生物可降解性等优良特性，在食品、农业、环境、组织工程和生物医药等方面有着广泛的应用。
市场上酶解所得的壳寡糖所用酶主要为诱导酶，易受产物的阻遏作用而不利于工业生产。本论文选育一株组成型壳聚糖酶产生菌并对其培养基成分和培养条件进行优化，并用盐析法对粗酶液进行提取。同时以木糖母液为廉价碳源，通过微生物发酵制备壳聚糖，并对壳聚糖提取工艺作了研究。此外用壳聚糖粗酶液降解壳聚糖，对其降解产物进行初步分析。
以壳聚糖为唯一碳源利用透明圈法，从养殖虾的池塘污泥中分离出8株产壳聚糖酶酶活较高的菌种。经过进一步的复筛，最终得到一株产非诱导型壳聚糖酶的菌株，确定该菌株TCCC150018为试验菌株，其酶活为2.48U/mL。经过形态特征观察以及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定，确定TCCC150018为蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）。
在单因素试验的基础上，通过响应面分析法确定在酵母浸粉16g/L，葡萄糖11.5 g/L，吐温-80 1.2g/L条件下酶活力可达到4.92 U/mL，是优化前的1.98倍。并确定酶的最佳培养温度30℃、pH为6.5、接种量为4%、培养时间为39h。
通过硫酸铵分级盐析将壳聚糖酶进行纯化，可知80%的硫酸铵饱和溶液最有利壳聚糖酶的获得。用粗酶液降解壳聚糖并对产物进行薄层层析，结果表明：酶解产物中含有氨基葡萄糖和三种壳寡糖。