[00313330]真菌基因定点插入突变的近原位回补方法
交易价格：
面议
所属行业：
生物化工
类型：
发明专利
技术成熟度：
正在研发
专利所属地：中国
专利号：CN201611041330.0
交易方式：
技术转让
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技术入股
联系人：
广西大学
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所在地：广西壮族自治区南宁市
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对所交付的所有资料进行保密
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技术详细介绍
本发明公开了一种真菌基因定点插入突变的近原位回补方法，将修饰过的互补基因片段和U6启动子驱动携带抗性基因特异识别序列的sgRNA表达盒与根癌农杆菌T‑质粒整合，构建以诺尔丝菌素为抗性筛选标记的根癌农杆菌介导的病原真菌基因定点互补载体；用该互补载体转化病原真菌基因插入失活突变体的孢子，依赖该突变体所携带的Cas9对靶标位点进行切割，从而实现将互补基因片段准确插入突变体的抗性基因靶标序列。发明人将该法应用于甘蔗鞭黑穗菌Δmfa2、prf或g827突变株实现了互补DNA片段的准确定点插入，使目标基因功能恢复，具有简易性、高效性和准确性，为研究病原真菌功能基因组学提供了重要工具。
本发明公开了一种真菌基因定点插入突变的近原位回补方法，将修饰过的互补基因片段和U6启动子驱动携带抗性基因特异识别序列的sgRNA表达盒与根癌农杆菌T‑质粒整合，构建以诺尔丝菌素为抗性筛选标记的根癌农杆菌介导的病原真菌基因定点互补载体；用该互补载体转化病原真菌基因插入失活突变体的孢子，依赖该突变体所携带的Cas9对靶标位点进行切割，从而实现将互补基因片段准确插入突变体的抗性基因靶标序列。发明人将该法应用于甘蔗鞭黑穗菌Δmfa2、prf或g827突变株实现了互补DNA片段的准确定点插入，使目标基因功能恢复，具有简易性、高效性和准确性，为研究病原真菌功能基因组学提供了重要工具。
