[01927322]蛋白质组样品处理及定量标记试剂盒

一、蛋白质组样品提取和处理试剂盒膜蛋白质等疏水性蛋白质存在着疏水性强， 在 样品预处理过程中难以溶解与酶解的问题，严重制约了膜蛋白质组和全蛋白质组分析的 鉴定覆盖度。本团队研发的样品提取和处理试剂盒能够实现常规量或微量组织、细胞和 体液样品中蛋白质的高效提取、溶解与酶解， 尤其适合膜蛋白质等强疏水性蛋白质或全 蛋白质组的深度覆盖定性和定量研究。已申请 3 项发明专利，其中 1 项获得授权。试剂 盒中配有：蛋白质提取试剂（10 mL）、超滤离心管、蛋白质处理试剂 1 和 2，以及缓冲 液（50 mL）。该试剂盒具有以下优点：高溶解度提取——较现有的商品化试剂具有更强 的溶解能力（右图）普适性——适合所有的组织、细胞和体液样品预处理兼容性——酶 解产物无需纯化，能直接与任何色谱分离模式及 ESI 源或 MALDI 源质谱联用简便快捷 ——样品中蛋白质从提取到酶解前仅需 4 小时无需额外设备——仅需一台微型台式离 心机、组织匀浆器和移液器即可满足要求采用该试剂盒对 1000 个 HeLa 细胞进行处理， 采用 Lumos 三合一质谱仪（Thermo Fisher）鉴定，分离梯度 60 min，单次分析可实现 3000 个以上蛋白质的高效鉴定。

二、外泌体富集及蛋白质处理试剂盒外泌体，由于携带脂类、蛋白质、RNA 等多 种重要的生物功能分子，因此，在临床诊断和治疗监控中具有重要应用价值。然而， 外 泌体的环境组成非常复杂，因此，如何获得高纯度的外泌体是首要解决的关键问题。目 前，分离外泌体的金标准方法是超速离心法，然而，该方法采用多次重复的超高速离心 会造成外泌体破碎，回收率很低。此外， System Biosciences 和 Life Technologies 等公司 也先后开发了一系列针对不同样品来源的外泌体提取试剂盒，但这些试剂盒价格昂贵， 不适合大规模的临床样品分析。为了解决上述问题， 本研究团队开发了一种具有普适性 的外泌体高效富集试剂盒。具有样品用量少（血液样品 20-100 µL，尿液样品 1-2 mL）； 操作条件简单（仅需要普通离心机和冰盒即可）、外泌体富集时间短（1-2 小时）等优点。 为了实现对微量外泌体蛋白质组的高效处理和分析，本研究团队还自主开发了一种纯化 和处理外泌体蛋白质的试剂盒，可完成外泌体蛋白质的富集、标记和酶解等多个步骤， 整个处理时间不超过 5 小时。此外， 该试剂盒还具有抗干扰强、蛋白质回收率高、所需 设备简单等特点。能够满足科研， 以及临床持续分析、样品数量大， 以及样品量有限等 苛刻要求。目前已申请 2 项国家发明专利和 1 项国际发明专利。

三、蛋白质组定量标记试剂盒为了实现蛋白质组的精准定量， 本研究团队还发展了 具有自主知识产权的蛋白质组定量标记试剂盒，并构建了完善的样品预处理、分离、质 谱采集和数据解析的体系。该试剂盒不受限于样品种类，可实现高准确度、高精密度、 高通量、高覆盖度的蛋白质组定量分析。相比于目前常用的蛋白质组定量试剂盒（iTRAQ、 TMT），不仅定量准确度显著提高，而且可以在宽动态范围内实现准确定量。在相当的 定量通量下（6-8 重样品同时分析），分析成本显著降低。具有大规模蛋白质组定量分析 的应用潜力。该试剂盒已被成功用于病变标志物的发现、生物过程及疾病的发生发展中多时间多条件监控、食品蛋白质组中目标蛋白质的绝对定量等领域。已申请 3 项发明专 利，其中 1 项获得授权。合作要求及方式技术转让、技术服务、技术入股、合作开发。