[01920625]CRISPER-Cas9系统介导的羊MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法
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所在地：内蒙古自治区呼和浩特市
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技术详细介绍
本发明涉及CRISPER-Cas9系统介导的羊MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法,其是根据羊的MSTN基因序列,构建基于CRISPER-Cas9系统的gRNA表达载体,并根据gRNA作用位点构建含有外源基因的且可以整合至宿主基因组中的供体质粒,然后将优化的CRISPER-Cas9载体、上述构建的gRNA表达载体和线性化的供体质粒共同转入羊的成纤维细胞中,获得羊MSTN基因敲除且定点整合外源基因的细胞。本发明构建的CRISPER-Cas9介导的打靶载体为羊MSTN基因的敲除和外源基因的定点整合提供了一种简便快速安全的途径,大大提高了转基因细胞系的筛选效率。该方法实现了不添加任何筛选标记即可筛选定点整合外源基因细胞系,大大提高了转基因动物的安全性,对羊的遗传育种具有重要价值。