[01791757]中华鳖抗病相关基因的筛选与克隆

本项目在前期研究的基础上,于2011年获得宁波市自然基金资助（项目编号2011A610012）,经过2011-2012年的努力,现已完成项目内容。本项目采用嗜水气单胞菌攻毒健康中华鳖,采用直接选择的方式筛选出来中华鳖抗病和易感两个群体。分别取抗病组和易感组中华鳖的肝脏、脾脏等组织,提取RNA后送往深圳华大基因进行转录组测序（RNA-Seq）及DGE表达谱分析,最终再在抗病组中筛选到802个上调基因,1412个下调基因。对两组中差异表达量大于128（27）倍的基因进行GO注释分析,发现这些基因主要参与的生物学过程为：免疫应答、能量代谢、细胞骨架、细胞周期等。筛选到免疫应激过程中差异表达的免疫相关基因序列;选择与能量代谢密切相关的肌酸激酶作为研究对象,完成了对肌酸激酶（CK）三种亚型的克隆,研究了三种亚型的肌酸激酶在中华鳖的表达,结果发现这三种亚型同时在骨骼肌和心脏中表达,这是有别于哺乳类和鸟类的非常独特的现象;同时还研究了和应激相关的热休克蛋白家族（HSPs）在免疫应激前后的表达情况。以上工作为研究中华鳖免疫应激过程中差异基因的表达和能量代谢奠定了基础。