[01764723]分子选育高产乙醇酿酒酵母

能源是人类赖以生存和发展的关键因素，燃料乙醇作为石油能源的替代物，逐渐成为世界各国研究的热点。酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是传统的乙醇生产菌株，其乙醇生产能力主要取决于乙醇的合成与分解代谢的动态平衡。乙醇脱氢酶SFA1是酿酒酵母乙醇代谢分解的关键酶。敲除乙醇脱氢酶基因可有效地降低酵母的乙醇分解代谢活性，提高酵母细胞合成乙醇的能力。 SFA1基因编码的酶具有乙醇脱氢酶和甲醛脱氢酶双功能活性，以质粒pUG6和pUG66为模板进行PCR构建带有Cre/loxP系统的酿酒酵母乙醇脱氢酶基因敲除组件，转化酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）YS1，并将质粒pSH47转入阳性克隆子，诱导表达Cre酶切除marker基因，在原ORF基因处保留一个loxP位点，获得双倍体基因缺陷型酵母突变株YS1-SFA1。突变株YS1-SFA1的乙醇分解代谢活性降低，乙醇产量提高8.0%，突变体菌体生长与野生菌相似，且稳定遗传。