[01713334]稳定表达TMEM16A氯通道蛋白的TE-1肿瘤细胞株的建立及其鉴定
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技术详细介绍
利用脂质体转染技术将高纯度的TMEM16A基因转染至人食管鳞状细胞癌TE-1细胞中进行稳定表达，继而经过抗生素G418对细胞株进行筛选，形成对G418具有抗性的单克隆细胞株，自此建立稳定表达TMEM16A钙激活氯通道的细胞系（TE-1-TMEM16A细胞），之后通过激光共聚焦显微镜技术、RT-PCR技术、Western-blot技术和免疫组织化学技术分别对该细胞系进行检测，测定TE-1-TMEM16A细胞中是否过表达了TMEM16A钙激活氯通道蛋白，以此鉴定稳转细胞系是否构建成功。将TMEM16A基因转染至TE-1肿瘤细胞中进行外源性过表达，避免了瞬时转染所存在的不足，如转染效率低、表达不稳定以及浪费转染试剂、浪费人力和时间等。