[01689494]大豆异黄酮的提取及其单体Genistein对人胃癌细胞中PI3K-AKT信号途径影响的研究

大豆和豆制品具有广泛的生物功效，这些功效均与异黄酮密切相关。自然界中异黄酮资源十分有限，大豆是唯一含有异黄酮且含量在营养学上有意义的食物资源，如能充分利用大豆中的活性成分，提高其附加值，一定能取得良好的经济效益和社会效益。金雀异黄素(Genistein)是异黄酮类化合物的主要成分之一，研究表明，Genistein可抑制白血病、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、大肠癌、淋巴瘤和黑色素瘤等多种肿瘤的生长，因此认为Genistein是一种很有潜力的肿瘤抑制剂。由于Genistein是一种蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)特异性抑制剂，所以其抗癌活性是否与调节体内信号传导分子磷酸化状态有关引起人们的关注。Akt是细胞内信息传导途径中的一个重要的蛋白激酶，是PI3K/Akt信号传导途径的中心环节，它在控制细胞存活和凋亡过程中具有重要作用。最近在许多人类肿瘤中发现，PKB/Akt信号传导通路异常与肿瘤发生、发展关系密切，因此，Akt可能成为抗肿瘤治疗的一个新靶点。但是Genistein对人胃癌细胞中Akt信号传导途径的影响尚不十分明确，故该研究采用Genistein诱导胃癌细胞，观察其对PI3K-AKT信号传导途径各成员分子表达及活性的影响，同时观察PI3K的抑制剂对Genistein抑制肿瘤细胞增殖作用的影响，进一步探讨Genistein抗癌作用机制，为将Genistein用于预防胃癌提供理论依据。本试验分两部分进行，第一部分以发芽大豆(大豆发芽后异黄酮含量有明显的提高)为原料，采用微波与酒精梯度提取技术，研究提取大豆异黄酮的最佳工艺。采用正交试验设计确定了提取大豆异黄酮的最佳工艺参数为：微波作用时间24min，作用功率560W，酒精梯度95%：70%：40%。第二部分研究Genistein对人胃癌细胞中PI3K-AKT信号途径的影响，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测Genistein对SGC-7901增殖的抑制作用，采用Hoechst33342染色和DNA ladder的方法观察Genistein对SGC-7901凋亡的诱导作用，采用Western blot方法检测不同浓度Genistein处理后的SGC-7901 细胞中Akt、p-Akt (Ser473)、p-Akt (Thr308)、p-PDK和PTEN表达的影响；并观察PI3K特异性抑制剂Ly294002预处理抑制Akt磷酸化后对Genistein抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡有无影响，得出如下结论：(1)Genistein对SGC-7901细胞增殖的抑制作用具有剂量依赖性和时间依赖性。(2)Genistein可诱导SGC-7901细胞发生凋亡。(3)Genistein对SGC-7901细胞中Akt蛋白的表达没有明显影响，但显著下调两种磷酸化蛋白的表达。(4)Genistein可通过上调PTEN的表达和抑制p-PDK的表达而抑制Akt的磷酸化。(5)Genistein抑制SGC-7901增殖和诱导其凋亡作用与其抑制Akt蛋白磷酸化有关。