[01581607]以壳聚糖衍生物为载体黏膜免疫传递系统的构建及其在新城疫DNA疫苗传递中的应用

疫苗免疫接种不是预防畜禽传染性疾病的唯一方法,但却是最有效而实用的方法。为了达到提高DNA疫苗的细胞内转运效率、提高免疫效果、增加给药途径、诱导黏膜免疫的目的,本项目组自行合成了生物材料壳聚糖衍生物N-2-HACC和CMC,并以N-2-HACC/CMC纳米粒为载体,以NDVF基因真核表达载体pVAXⅠ-F（o）-C3d6为载药模型,采用聚电解质复合法制备pFDNA-N-2-HACC/CMC-NPs,并对pFDNA-N-2-HACC/CMC-NPs理化特性、稳定性、细胞毒性和免疫效果等进行了详细研究。本项目制备的pFDNA-N-2-HACC/CMC-NPs形态规则、外形圆整,平均粒径为309.7±6.52 nm,Zeta电位为49.9±4.93 mV,包封率为92.27±1.48 %,载药量为50.75±1.35 %;体外抗DnaseⅠ降解试验结果表明,pFDNA-N-2-HACC/CMC-NPs能保护质粒DNA免受核酸酶降解;体外释放试验结果表明,pFDNA-N-2-HACC/CMC-NPs在体外释放是一次突释后的连续缓释过程;体外表达试验结果表明,经N-2-HACC/CMC-NPs包裹后NDV F基因质粒DNA没有破坏,保持了其良好的生物活性;贮藏稳定性试验结果表明,在37℃、20℃、4℃、-20℃贮藏3周pFDNA-N-2-HACC/CMC-NPs外观无明显变化,稳定性良好;细胞毒性试验结果表明,pFDNA-N-2-HACC/CMC-NPs毒性较小,具有较高的安全性; SPF鸡体内免疫接种试验结果表明,pFDNA-N-2-HACC/CMC-NPs能诱导较强的免疫反应,与对照组比较抗原DNA的释放时间长; pFDNA-N-2-HACC/CMC-NPs i.n.免疫与肌注相比,激活黏膜免疫应答部位的能力更强,并诱导机体产生较强的细胞免疫、体液免疫、黏膜免疫和含量较高的特异性IgG和IgA; IL-2、IL-4和 IFN-γ的分泌量和免疫鸡脾淋巴细胞转化率均有明显变化;攻毒后,黏膜免疫组血清中IgG、IL-2、IL-4 和IFN-γ含量持续升高,并能达到较高的保护率。本项目研究可为我国现代畜禽养殖业健康发展和公共卫生、食品安全体系的建立提供保障,研究成果也可应用到更多的兽用疫苗和蛋白类及核酸类药物（如DNA疫苗）体系中,促进疫苗在畜牧业和临床的实际应用。