[01551927]茯砖茶降糖功能成分及其产品开发研究

1. 主要预期成果 1.1 开发出具有专属糖尿病人群的功能产品1-2项。 ① 以富金花茯茶为原料研制出了富金花茯茶降糖保健茶饮料,并对其制备方法、保质期、口感、灭菌方法、汤色等因素进行了研究;且通过糖尿病小鼠模型对茶饮料的降糖功效进行了验证。结果表明,富金花茯茶降糖保健茶饮料的降糖功效与富金花茯茶基本一致,是一种新型的绿色天然降糖保健饮品。 ② 将冠突散囊菌（俗称金花）从茯茶中分离出来,通过超声波破碎、微波辅助破碎等方面将冠突散囊菌破壁后制成金花降糖保健产品。通过动物实验发现,破壁后的冠突散囊菌具有非常优秀的降糖功效,以之为原料制成的金花降糖保健产品对糖尿病有一定的预防作用与治疗作用。 1.2 提供项目的研究总结报告,在国内外刊物上发表研究论文2～3篇。 项目在研期间,在国内外刊物上共发表科技论文5篇,申请专利5项,专利授权3项,达到预期成果。 2. 主要技术指标 2.1通过高通量药物筛选PPARγ/RXRα双核受体模型对茯砖茶水浸出物5个溶剂相进行初筛,选择出活性响应值高的有机相。 高通量药物筛选PPARγ/RXRα双核受体模型筛选出茯砖茶水浸出物5个溶剂相活性响应值高的有机相,将冠突散囊菌粗提物置于硅胶柱中进行梯度洗脱,通过凝胶柱层析分离得到3个单体化合物,并利用反相硅胶柱对其进行分离纯化,以备后续分析检测使用。 2.2对初筛效果好的有机相通过活性跟踪分离纯化得到有效组分或活性单体化合物。 采用两种不同方法对茯砖茶中活性成分茶褐素进行提取,并利用紫外光谱法对产物结构表征进行检测,结果表明提取物主要成分为多羟基酚类物质,并含有羧基,可能还含有蛋白质和与其结合的多糖。 2.3对有效组分或活性单体化合物进行体外活性试验。 选用3T3-L1小鼠前脂肪细胞、L6人肝细胞、HepG2人肝癌细胞构建胰岛素抵抗细胞模型,对茯砖茶水提物、金花水提物的降糖功效进行了体外降糖实验。实验结果表明,茯砖茶水提物、金花水提物均能有效抑制三种细胞的胰岛素抵抗作用,使之糖脂代谢基本恢复正常。其中,金花水提物的效果要明显优于茯砖茶水提物,说明金花水提物中含有大量降糖活性功效成分。 2.4对茯砖茶中有效组分或活性单体化合物进行动物模型试验、急性毒理试验及剂量研究。 ① 采用腹腔注射四氧嘧啶诱导糖尿病的昆明种小鼠为实验模型,通过灌胃茯砖茶、金花粉、黑毛茶水提物,以及糖尿病治疗药物二甲双胍,采用血液指标检测、肝脏病理切片观察等方法进行糖尿病预防及治疗实验。实验结果表明,茯砖茶与金花粉水提物对糖尿病小鼠的预防及治疗效果明显优于黑毛茶水提物,且与二甲双胍的治疗效果接近,证明前两者中可能存在大量具有降糖作用的活性单体化合物。 ② 采用腹腔注射四氧嘧啶诱导糖尿病的昆明种小鼠为实验模型,通过灌胃茯砖茶中分离出的茶褐素、茶氨酸、茶多酚、儿茶素等有效活性成分,以糖尿病治疗药物盐酸二甲双胍为阳性对照,进行糖尿病治疗试验。实验结果表明,茯砖茶中分离出的茶褐素、茶氨酸、茶多酚、儿茶素的有效活性成分降糖效果均不理想,无法达到茯砖茶的治疗效果。这表明茯砖茶中主要的降糖功效成分并不是已知的茶褐素、茶氨酸、茶多酚、儿茶素等成分,有望从中分离出一种新的降糖功效成分。 ③ 采用SPF级昆明种小鼠对金花粉、破壁金花孢子粉进行了急性毒理试验,检测其半数致死剂量。经过10天的大剂量直接灌胃试验,各组小鼠未出现死亡迹象。结果表明,金花粉和破壁金花孢子粉基本无毒。 2.5对茯砖茶有效组分或活性单体化合物进行制备工艺研究及产品研发。 ① 金花水提物提取工艺优化 采用正交试验法对金花水提物制备工艺进行优化。通过对料液比、提取时间、提取温度等三个因子分别研究,最终确定金花水提物的最佳制备工艺,并通过中试试验验证该工艺。 ② 茯砖茶中茶褐素的提取纯化研究 以益阳产茯砖茶为原料,以索氏浸提的方法提取粗茶褐素,考察时间对粗茶褐素提取率的影响,再以萃取的方法依次去掉粗茶褐素中的茶黄素、茶红素、皂甙等杂质,最后采用超声辅助结合SEVAGE萃取法除去蛋白得到茶褐素精品,重点考察了萃取次数对去除蛋白的效果。结果显示,索氏浸提120min可将茯砖茶中粗茶褐素完全提取,萃取达15次才可将茶褐素结合的蛋白完全除去,茶褐素水溶液在272nm处有明显的吸收,化学结构与相关文献报道一致。 ③ 茯砖茶浸提物在美国科罗拉多州立大学进行Ⅱ糖尿病动物模型实验,证明降糖效果显著,其结果在项目组2012年8月26日考察时曾由Tiffany Weir汇报,结果暂未发表。 3. 其它指标 项目组2012年以来共培养博士生3名、硕士生7名、新晋教授2名,达到预期培养目标。