技术详细介绍
过表达AtPAPL转录因子并同时RNA干涉smCOMT基因提高丹参中迷迭香酸和丹酚酸B含量的方法
一、发明创造简介：
一种转基因同时提高丹参中迷迭香酸和丹酚酸B含量的方法，由下述步骤组成：拟南芥PAP1转录因子和丹参COMT基因cDNA序列的克隆；构建过表达么蒯尸J转录因子并同时RNA干涉SmCOMT基因的植物表达载体；制备含有过表达Atpapl转录因子并同时RNA干涉。SmCOMT基因的植物表达载体的根癌农杆菌菌株；转基因丹参植株的获得；实时荧光定量逆转录．聚合酶链式反应分别检测AtPAAPL转录因子和SmCOMT基因在转基因丹参植株中的表达；对获得的转基因丹参植株中迷迭香酸和丹酚酸B的含量进行高效液相色谱测定，筛选获得二者含量显著提高的转基因丹参植株。采用本发明获得的转基因丹参植株，生长三月龄的干燥根中，迷迭香酸的含量为9．59士0．36 mg/g，丹酚酸B的含量为55．87±0．59 mg/g，分别是同时期非转化普通丹参干燥根中迷迭香酸和丹酚酸B含量的1．15倍和1．79倍。
二、创新点：
在丹参中过表达AtPAPL转录因子并同时RNA干涉SmCOMI基因的表达，不仅激活了酚酸合成途径关键酶基因的协同表达，同时抑制了木质素合成关键酶基因的表达，使原本合成木质素的代谢流偏向生成酚酸类活性成分，进一步提高了丹参中迷迭香酸和丹酚酸B的含量
三、发明的应用价值和市场前景：
随着对丹参药理活性的深入研究，丹参市场需求的不断扩大，丹参资源供不应求。传统的人工栽培丹参技术缺乏系统的选育和提纯复壮，导致丹参的种质资源混杂，药用成分含量不同，品种退化，严重影响了丹参的质量和产量。拟申请专利克服了传统方法的缺陷，采用植物细胞工程、基因工程和代谢工程等现代生物技术，通过提高丹参有效成分含量筛选优良丹参品种，保证丹参药材质量的优良性和稳定性，解决丹参供求矛盾，为丹参活性成分合成研究及分子育种奠定基础。