技术详细介绍
本项目研究北豆根酚性生物碱抗肿瘤活性效应指纹图谱。研究内容包括: (1)北豆根酚性总碱的分离纯化: 采用酸提碱沉的方法提取粗总碱,设计不同浓度的酸水溶液,采用不同的提取方式,如温浸、超声提取、回流提取等,结合提取率、总生物碱含量以及活性数据,综合确定了最佳的提取工艺。 (2)色谱指纹图谱的建立: 高效液相色谱法具有专属性强、稳定性高、反映的信息量大等特点,我们采用高效液相色谱法建立北豆根酚性生物碱的活性效应指纹图谱。色谱条件的优化包括不同型号、不同长度色谱柱的选择,不同柱温的选择,不同波长的选择,不同流速的选择,流动相的优化选择等。由于指纹图谱对色谱峰的峰形和分离度要求较高,故采用梯度洗脱的色谱条件。色谱条件建立后得到的指纹图谱导入指纹图谱相似度计算软件进行色谱图的标准化,给出参照指纹图谱和相似度,进行共有峰和非共有峰的分析以及相关性的评价。 (3)体内体外抗肿瘤活性的评价: 体外采用MTT法(四氮唑盐法),选用人乳腺癌细胞,以IC50为指标进行数据处理。 (4)谱效关系评价及关键成分的确定: 建立谱效评价数据处理体系,利用多元线性回归分析方法,对指纹图谱各峰参数处理结果与细胞毒活性数据,分离纯化工艺数据与指纹图谱数据,以及细胞毒活性数据与提分离纯化工艺参数分别进行处理,确定北豆根酚性生物碱中起关键作用的色谱峰。
本项目研究北豆根酚性生物碱抗肿瘤活性效应指纹图谱。研究内容包括: (1)北豆根酚性总碱的分离纯化: 采用酸提碱沉的方法提取粗总碱,设计不同浓度的酸水溶液,采用不同的提取方式,如温浸、超声提取、回流提取等,结合提取率、总生物碱含量以及活性数据,综合确定了最佳的提取工艺。 (2)色谱指纹图谱的建立: 高效液相色谱法具有专属性强、稳定性高、反映的信息量大等特点,我们采用高效液相色谱法建立北豆根酚性生物碱的活性效应指纹图谱。色谱条件的优化包括不同型号、不同长度色谱柱的选择,不同柱温的选择,不同波长的选择,不同流速的选择,流动相的优化选择等。由于指纹图谱对色谱峰的峰形和分离度要求较高,故采用梯度洗脱的色谱条件。色谱条件建立后得到的指纹图谱导入指纹图谱相似度计算软件进行色谱图的标准化,给出参照指纹图谱和相似度,进行共有峰和非共有峰的分析以及相关性的评价。 (3)体内体外抗肿瘤活性的评价: 体外采用MTT法(四氮唑盐法),选用人乳腺癌细胞,以IC50为指标进行数据处理。 (4)谱效关系评价及关键成分的确定: 建立谱效评价数据处理体系,利用多元线性回归分析方法,对指纹图谱各峰参数处理结果与细胞毒活性数据,分离纯化工艺数据与指纹图谱数据,以及细胞毒活性数据与提分离纯化工艺参数分别进行处理,确定北豆根酚性生物碱中起关键作用的色谱峰。