[01479663]84K杨遗传转化体系的建立和转OsNHX1基因耐盐84K杨的培育
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技术详细介绍
该项目建立了84K杨叶片外植体再生系统，最佳不定芽诱导培养基为MS + 6-BA1.0mg/L+ NAA 0.1mg/L，分化率达95%以上，最佳不定芽生根培养基为1/2 MS + NAA 0.05mg/L。确定了84K杨不定芽诱导Basta临界耐受浓度为5mg/L，不定根诱导Basta临界耐受浓度为5mg/L。采用农杆菌介导的方法，将含标记基因bar和耐盐基因 OsNHX1的p3301-OsNHX1转入84K杨，经不定芽和不定根阶段连续筛选，获得3株稳定的Basta抗性植株。经PCR和Southern杂交检测，OsNHX1基因已整合到84K杨基因组，Northern 杂交分析表明，OsNHX1基因能稳定表达。耐盐性实验表明，转基因植株能在200mmol/L NaCl条件下能正常生长，而对照野生型84K杨植株在200mmol/L NaCl条件下萎嫣死亡。