[01468624]哈蟆油的营养传递过程及免疫活性成分微球的制备

“哈蟆油的营养传递过程及免疫活性成分微球的制备工艺研究”是通过探讨哈蟆油中脂肪酸的相对组成与其食物的相关性,揭示脂肪酸在食物链中的营养传递的过程。本课题以脂肪酸营养传递为出发点,研究其免疫调节作用,并确定有效部位及其最佳提取工艺,利用微球制备技术平台,使其应用工业化,扩大中药制剂应用的范围,创造更大的经济效益和社会效益。同时研究了哈蟆油的抗氧化作用、对体内雌激素的影响作用,以及哈蟆油微球急性毒理试验,为患者安全用药提供依据。 主要取得的成果有： （1）考察了林蛙不同成长阶段中食物的脂肪酸种类及数量,结果显示,20种海藻中已测定出的不饱和脂肪酸均含有70﹪～90﹪;3种直翅目昆虫中脂肪酸的种类齐全,不饱和脂肪酸含量分别占总脂肪酸的72.79﹪（斗蟋属）、66.05﹪（棺头蟋属）、73.25﹪（蟋蟀类）,三种昆虫中脂肪酸种类丰富。 （2）哈蟆油质量评价表明,不同产地哈蟆油膨胀度、浸出物、粗脂肪含量均有一定的差异,氨基酸含量及脂肪酸含量有明显的差异,范围分别在5.66～49.98﹪和55.05～94.06﹪之间,其中以吉林产哈蟆油质量较好。 （3）建立了气相色谱法测定哈蟆油中脂肪酸种类及含量,结果显示,哈蟆油25种脂肪酸的相对含量为812.89mg/100g,EPA和DHA的总含量为17.15﹪,与鱼油接近,DHA和EPA为人体必需脂肪酸。通过小鼠免疫力低下模型,验证哈蟆油能调节小鼠血液、脾和胸腺中脂肪酸含量的作用。试验中比较了小鼠免疫力低下模型前后血液和免疫器官中25种脂肪酸相对含量的变化。结果显示,小鼠造模后,饱和脂肪酸变化很小,PUFAs EPA极显著降低（p＜0.001）,说明小鼠在受到外界刺激引起免疫力低下后,体内的脂肪酸含量也随之变少,初步证明了机体的免疫功能与体内不饱和脂肪酸含量有关。当给予哈蟆油后,其免疫器官和血液中的PUFAs EPA等脂肪酸均呈现显著性升高。因为EPA、DHA均不能在人体内合成,只能从外界摄取。而我们通过对哈蟆油的成分分析中发现哈蟆油含有大量的EPA和DHA,这说明小鼠体内增加的EPA和DHA成分,是从哈蟆油中直接摄取的,同时也证明了哈蟆油中的脂肪酸成分参与了机体的免疫调节。这与我们认为脂肪酸可以作为营养传递研究的指示作用相符。 （4）通过X射线照射和环磷酰胺造成小鼠免疫模型,结果显示,哈蟆油对免疫力低下小鼠脾T淋巴细胞亚群的作用结果表明,与空白对照组比较,模型组小鼠的脾T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+,比值差异均有统计学意义（p＜0.001）;与模型组比较,哈蟆油低剂量组小鼠的脾T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+水平明显降低（p＜0.001）,CD4+/CD8+比值明显降低（p＜0.05）;说明小鼠服用哈蟆油水溶液后,能提高机体免疫力。在免疫力低下小鼠脾淋巴细胞中IL-2含量的研究中发现,哈蟆油哈蟆油能促进小鼠脾内单核巨噬细胞分泌IL-2的能力,增强机体免疫力的作用。 （5）我们推测并证明了哈蟆油免疫调节作用可能为其中蛋白质和脂肪酸共同作用的结果。采用水酶法提取其有效部位,确定了最佳提取工艺,将其制备成微球,确定其最佳制备工艺,进一步将其制备成哈蟆油微球胶囊,完成了其质量评价,并为工艺生产提供参数。 （6）课题组进一步采用D-半乳糖造成小鼠衰老模型,给药哈蟆油,结果显示,哈蟆油能提高衰老小鼠体内MDA和XOD含量,降低NO、GSH及MPO的含量,对机体具有一定抗氧化作用,但对雌激素水平无显著影响。且哈蟆油微球急性毒理试验表明,哈蟆油微球属无毒物质。 （7）本项目完成了“哈蟆油在制备治疗、预防免疫功能异常所致疾病药物中的用途”专利申请,专利申请号200910067276.0。 （8）完成期刊发表： ①哈蟆油对免疫力低下小鼠体内脂肪酸含量的影响,中国老年学杂志,2010,30（11）：3132～3133。 ②哈蟆油的免疫调节作用及其微球的制备工艺,吉林大学学报,2011,4（7）：665～669。 ③《中国药典》中哈蟆油的基原问题诹议,中国中药杂志,2010,21（11）：2931～2933。 ④哈蟆油中免疫活性部位提取工艺的研究,中国药房,待发表。 ⑤哈蟆油对小鼠抗氧化作用及其脂肪酸含量的影响,中国药房,待发表。 （9）完成3篇硕士论文： ①2009年“哈蟆油对小鼠免疫功能影响及脂肪酸构成的研究”; ②2010年“哈蟆油微球制备工艺的研究”; ③2011年“名贵中药哈蟆油质量评价研究（Ⅲ）”。