[01468271]利用EST信息资源大规模快速克隆家蚕功能基因

1、研究建立了世界上最全的家蚕后部丝腺细胞EST数据库，测得9，948条EST序列，占家蚕丝腺组织EST数据库资源的32.77％，经序列拼接分析得到2，861个一致性序列，被注释的一致性序列达1，335个，未被注释的一致性序列达1，526个，揭示了家蚕后部丝腺细胞基因表达谱规律，从分子水平证明了五龄期后部丝腺蛋白合成比四龄期更加活跃。2、建立了世界上首个家蚕功能基因电子克隆计算机辅助系统。该系统对BLAST软件和CAP软件进行二次开发，实现了功能基因电子克隆的本地化，并大大提高了信息处理的效率。该系统为家蚕功能基因的研究提供了创新性技术平台。3、利用家蚕功能基因电子克隆计算机辅助系统，通过对所有的家蚕EST序列进行全面的比对、拼接，共筛选到6，293个与功能基因有关的基因片段，获得了1，149个具有完整ORF阅读框的家蚕功能基因，克隆鉴定了616条为新的功能基因mRNA序列，并在NCBI GenBank中登录，已被用于495个家蚕新基因的注释，占全世界现已被注释家蚕功能基因的36.67％，极大地丰富了家蚕的功能基因资源。4、通过研究筛选到5，144条具有不完整ORF的基因片断，这些cDNA片断是新的功能基因片断，为快速克隆全长的mRNA序列提供了重要的依据。