本发明提供了一种利用根特异启动子与抗病RIP基因培育烟草抗青枯病品系的方法,包括根特异启动子的克隆,抗病基因RIP的克隆,抗烟草青枯病表达载体的构建,培育抗青枯病转基因烟草,以及接种转基因烟草青枯菌进行材料的筛选鉴定。将烟草根特异启动子运用于烟草分子育种上,提高了转基因安全性,由根特异启动子携带光谱抗病基因在烟草根和茎部表达,对烟草青枯病有较强的抵抗能力甚至达到免疫功能。通过对转基因烟草进行RT-PCR鉴定,表明了RIP基因不在烟草叶片表达,通过对转基因烟草进行接种青枯菌进行抗性鉴定,得到了高抗烟草青枯病的转基因新材料,为培养高抗烟草青枯病的转基因植株奠定了有利的基础。