[01371886]一种bFGF短肽疫苗通过靶向癌细胞和肿瘤微血管的双重免疫治疗肝癌的研究

1、课题来源：国家自然科学基金。 2、研究目的与意义： 肿瘤的生长与转移依赖血管生成,因此,通过抗肿瘤新生血管的生成去阻断肿瘤细胞的营养供给,达到阻止肿瘤生长的目的,对肿瘤治疗有重要的意义。 3、主要论点与论据： 碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是重要的促血管生成因子,它不仅参与肿瘤新生血管的形成,还能刺激血管内皮细胞的增殖和分化,促进血管形成并提高血管通透性,从而促进癌细胞的转移。在黑色素瘤、bFGF是最重要的自分泌生长因子。通过对内皮细胞和成纤维细胞的有丝分裂作用,由黑色素瘤产生的bFGF通过旁分泌途径促进血管形成和纤维基质形成。虽然在正常黑素细胞bFGF不表达,但它总是在癌变的黑色素瘤细胞中表达。大多数黑色素瘤显示bFGF和FGFR高表达,这是黑色素瘤细胞增殖和存活的关键。因此,靶向bFGF的免疫治疗可能是一种很有前途的抑制黑色素瘤的策略, 通过靶向bFGF的免疫,产生 bFGF 特异性的毒性 T 淋巴细（CTL）,一方面,这种 bFGF 特异性 CTL 能够直接杀伤高表达 bFGF 的黑色素瘤癌细胞;另一方面,这种 CTL 通过对形成肿瘤新生血管的内皮细胞（也高表达 bFGF）进行杀伤,通过杀伤癌细胞的同时也抑制肿瘤微血管生成达到双重抗癌的目的。 4、创见与创新： （1）制备出新型脂质体-黄芪皂苷佐剂复合物。通过黄芪皂苷的添加,能形成颗粒态的免疫刺激佐剂复合物,脂颗粒态的抗原比可溶性抗原具备更高的免疫原性,因此提高了抗原特异性CTL反应,显著增加疫苗的抗癌活性。（2）研究发现靶向bFGF的免疫产生的bFGF特异性毒性T淋巴细胞既可以导致血管内皮细胞的裂解而抑制肿瘤微血管的生成,也能造成针对表达bFGF的黑色素瘤癌细胞的杀伤,达到当初期望的双靶向治疗（既靶向血管内皮细胞,也靶向癌细胞本身）的目的。 5、社会经济效益,存在的问题： 本研究取得了较为理想的结果,发现靶向bFGF的免疫确实能带来双靶向抑制肿瘤的效果,一方面抑制肿瘤微血管的生成,另一方面能够造成对黑色素瘤癌细胞的特异性杀伤,根本原因是由于血管内皮细胞和黑色素瘤细胞都能够特异性的表达bFGF。因此我们力荐未来进一步研究,临床探索使用bFGF疫苗特异性治疗黑色素瘤可能带来很好的治疗前景。另外,我们的研究也发现黄芪皂苷-脂质体免疫佐剂复合物能够有效提升T细胞免疫应答,增加抗原特异性CTL反应,这对于肿瘤疫苗尤为重要,这些在未来免疫佐剂以及抗肿瘤疫苗的开发及应用方面可能有很好的实用价值。 存在的问题：第一,由于人源性bFGF和鼠源性bFGF同源性较强（大约95%的同源性）,加上bFGF在伤口愈合等正常生理活动中的作用,靶向bFGF的免疫可能会由于产生中和性抗体等原因导致正常bFGF功能的丧失,因此选用与人源性bFGF氨基酸序列相差较大的物种的bFGF作为抗原,可能既能保持得较好的抗原性也可以避免潜在的副作用。第二,我们曾试图合成爪蟾的bFGF多肽作为抗原蛋白,但由于真核生物蛋白构象的复杂性,原核生物表达载体不能形成正确的蛋白构象,无法形成bFGF特有的抗原决定簇,未来深入研究需要进一步解决。第三,虽然我们使用的脂质体-皂苷佐剂复合物可以带来较强的免疫源性,尽管黄芪皂苷比早期研究使用的皂树皂苷溶血活性低很多,但也难以完全避免其溶血活性,因此在使用中,不仅要慎重考虑其剂量,而且未来可能需要进一步探索更合适的使用方法,毕竟黄芪皂苷所带来的能提升抗肿瘤CTL活性的特质在肿瘤疫苗的研究中值得重视。第四,靶向bFGF的免疫对实体瘤的生长抑制非常显著,但对癌细胞肺转移的抑制程度较弱,可能与癌转移所涉及不止一种血管生长因子的原因有关,如果同时靶向几种不同的促血管生长因子疗效可能会更好。 6、历年获奖情况： 7、成果简介 本研究共发表SCI论文3篇,分别为项目号第一标注（影响因子3.3）,第二标注（影响因子1.68）,第二标注（影响因子0.8）。 （1）制备出新型脂质体-黄芪皂苷佐剂复合物。（2）发现完整的人源性bFGF和原计划使用的截短的人源性bFGF短肽具有相同的免疫原性,都能产生强烈的bFGF特异性免疫应答,进一步诱导出明显的抗肿瘤活性。（3）正常的黑色素细胞不表达bFGF,而癌变的黑色素瘤细胞高表达bFGF。由于这一特点,我们的研究证明bFGF可能是治疗黑色素瘤的一个非常重要的特异性靶点。