[01365638]草莓乙烯受体基因克隆及植物表达载体构建

(1)任务来源。 河北农业大学博士基金资助项目,编号2009-B-02。计划外项目。 （2）应用领域和技术原理。 应用领域：果蔬成熟衰老有关的基因克隆与表达 技术原理：通过反义和RAN干扰技术,抑制果实成熟有关的基因表达,以期延缓果实成熟衰老进程。 （3）性能指标 1. 克隆获得与草莓果实成熟有关的乙烯受体基因片段。 2. 构建了FaEtr2基因的反义和RNA干扰植物表达载体。 3. 建立了全明星草莓的高效再生体系,再生率75%左右。 4. 将FaEtr2-RNAi基因转入草莓组培苗组织。 5. 发表有关论文5篇。 （4）与国内外同类技术比较。 RNA干扰（RNA interference, RNAi）是最近几年才发展起来的研究生物体基因表达、调控与功能的一项新技术。广泛应用于调控植物的基因表达,其抑制效果优于反义RNA技术。本项目采用RNA干扰技术,抑制草莓果实成熟有关的FaEtr2基因表达,国内外未见报道。 （5）成果的创造性、先进性。 1.克隆了全明星和千代田草莓乙烯受体FaEtr2基因片段。 2.以全明星草莓乙烯受体FaEtr2基因的核苷酸序列为模板,构建了该基因带内含子的发夹状RNAi植物表达载体pBI121-Etr2-RNAi。 3.成功将FaEtr2-RNAi植物表达载体转入草莓苗组织,获得了全明星草莓FaEtr2-RNAi转基因苗。 （6）作用意义。 本研究选用我国华北地区主栽品种“全明星”草莓为试验材料,在已报道的FaEtr2基因序列的基础上,克隆草莓乙烯受体 FaEtr2基因部分特异序列,构建FaEtr2 基因反义及RNAi植物表达载体,优化全明星草莓体外培养的再生体系,研究植株再生和遗传转化过程中的影响因素,通过农杆菌介导法进行FaEtr2 RNAi植物表达载体对草莓的遗传转化,获得了FaEtr2-RNAi转基因植株,为进一步研究FaEtr2基因功能,揭示其在草莓成熟过程中的作用奠定基础,为应用生物技术方法,培育出具有抗软化、耐贮运特性的草莓品种奠定基础。