[01351305]温肺化纤汤介导Wnt经典信号通路调控骨髓间充质干细胞向Ⅱ型肺泡细胞分化的机制研究

本项目是在前期基础上,验证我们提出的“温肺化纤汤可能通过调节肺间质纤维化 微环境中细胞因子的浓度来调控BMSCs的定向分化”的假说,主要研究内容有：分离纯化 的大鼠BMSCs,观察温肺化纤汤对BMSCs增殖和迁移能力的促进作用;肺纤维化大鼠支气 管灌洗液诱导BMSCs分化成Ⅱ型肺泡细胞,筛选差异表达基因建立GFP-BMSCs嵌合大鼠肺 纤维化模型模型;观察温肺化纤汤干预的影响,温肺化纤汤对H2O2诱导大鼠肺间充质干 细胞氧化应激损伤的保护作用机制;卫矛化学成分的分离纯化和活性评价。 本研究结果显示肺纤维化大鼠的支气管灌洗液可以诱导BMSCs定向分化为Ⅱ型肺泡细 胞,而温肺化纤汤含药血清可以显著提升转化率,这与激活BMSCs的MAPK信号转导通路的相关基因有关,总共有24个基因表达有显著变化,其中明显上调的基因10个,明显下调 的基因14个。采用温肺化纤汤含药血清干预48h后,和支气管灌洗液组比较,基因芯片结 果显示pdgfb、Fgf16和Pdgfra等3个上调基因和Arf2、Braf、Chuk和Rasa1等4个下调基因 有显著变化,其结果需要后续动物实验结果验证。 随后课题组成功建立GFP-BMSCs嵌合大鼠肺纤维化,下图显示GFP-BMSCs可以在造模 第4天聚集在肺损伤部位,并分化为Ⅱ型肺泡细胞。采用温肺化纤汤连续干预28天,HE和 Masson染色均显示温肺化纤汤能够显著减轻博来霉素造成的肺纤维化损伤。 体外实验我们模拟肺纤维化的低氧环境,结果显示温肺化纤汤可以激活过氧化氢诱导的大鼠肺间充质干细胞的Akt蛋白磷酸化,促进Nrf2质蛋白和核蛋白表达,提高下游二相解毒酶HO-1的表达,从而平衡细胞内氧化/抗氧化系统,而具有抗氧化损伤作用。 卫矛是温肺化纤汤中的关键药味,但是研究结果很少,本研究对卫矛的化学成分进 行了系统分离纯化,对其主要成分的质谱裂解途径进行了研究,成功建立卫矛的质量控 制标准,为后期研究奠定了扎实的基础。