[01328576]茉莉花渣活性多糖的制备方法及其应用

1、课题来源与背景 茉莉花渣是木樨科茉莉花属中的茉莉花苞经熏制茶叶后的废异物,是加工生产茉莉花茶过程中的主要废弃物。风干样品呈黄褐色,带有浓厚的茉莉花香味。茉莉花渣中含粗蛋白20.8%、粗脂肪2.4％、粗纤维12.4％、水溶性碳水化合物8.04％、游离氨基酸3.41％、维生素C 0.21％等。茉莉花渣通常作废物处理,造成资源浪费、环境污染。目前,国内外有关茉莉花渣多糖的研究主要集中于多糖提取工艺,对于茉莉花渣多糖的分离纯化鲜有报道。目前,国内外针对多糖提取工艺的研究多采用传统热水浸提法,该方法提取溶剂单一,且多糖物质难以从植物细胞内释放出来;再者实验室常采用水提醇沉得到粗多糖,但现行工艺制备的多糖的分子量较为分散和混乱,有效成分不明且可重复性差,无法进行针对性的研究。因此,如何高效分离不同分子量的茉莉花渣多糖以及如何根据分子量应用到不同领域已成为茉莉花产业化亟需解决的瓶颈问题。 2、技术原理及性能指标 （1）茉莉花渣预处理：将茉莉花渣烘干至恒重,粉碎过筛,得到茉莉花渣粉末;将茉莉花渣粉末与无水乙醇按固液比为1：20 mg/mL混匀,超声振荡2-3 h后,过滤取滤渣,烘干至恒重,即为脱脂茉莉花渣粉末; （2）膨发性茉莉花渣粉末制备：将脱脂茉莉花渣粉末套袋,然后在20-27℃、超高压350-450 MPa下处理1-3 min后瞬间泄压,使茉莉花渣粉末成为膨发性茉莉花渣粉末; （3）茉莉花渣总提取物制备：在膨发性茉莉花渣粉末中按照固液比1：20 mg/mL加入水,然后装入聚乙烯塑料袋,混合均匀后,用纯碱调节pH值至7.5-8.5;将真空封口的塑料袋置于温度为15-25℃,压强为500-700 MPa的条件下提取,提取时间为5-7 min;将提取液离心,收集上清液;在上清液加入柠檬酸至中性;上清液经液氮速冻后,放入微波冷冻干燥机冷冻干燥,即得茉莉花渣总提取物; （4）正己烷-乙酸乙酯溶剂体系萃取：在茉莉花渣总提取物中按体积比为1：1.5-2加入正己烷-乙酸乙酯溶剂,所述正己烷-乙酸乙酯溶剂的正己烷：乙酸乙酯为2：5（v/v）;振摇,静置,待溶液完全分层后,上层即为正己烷-乙酸乙酯溶剂体系萃取物,下层为正己烷-乙酸乙酯溶剂体系萃取剩余物I;下层用同样的方法再萃取两次,得到正己烷-乙酸乙酯溶剂体系萃取剩余物II; （5）氯仿萃取：在正己烷-乙酸乙酯溶剂体系萃取剩余物II中按体积比1：1.5-2加入氯仿,振摇,静置,待溶液完全分层后,上层溶液即为氯仿萃取物,下层为氯仿萃取剩余物I;下层用同样的方法再萃取两次,得到氯仿萃取剩余物II; （6）正丁醇-甲醇溶剂体系萃取：在氯仿萃取剩余物II中按体积比1：1-3加入正丁醇-甲醇-水 溶剂,所述正丁醇-甲醇-水 溶剂的正丁醇：甲醇：水为4：2：5（v/v）;振摇,静置,待溶液完全分层后,上层溶液即为正丁醇-甲醇溶剂体系萃取物,剩余的下层为水相萃取物I;下层再用同样的方法萃取两次,得到水相萃取物II; （7）茉莉花渣粗多糖制备：向水相萃取物II中加入体积分数95%乙醇并在冰水中静置10-15h进行第一次醇沉,过滤得到沉淀物①;向沉淀物①中加入去离子水,加热溶解后过滤去除不溶物;再加入体积分数95%乙醇并在冰水中放置24h进行第二次醇沉,过滤得到沉淀物②;将所得沉淀②放入超声辅助真空冷冻干燥机冷冻干燥,即得茉莉花渣粗多糖; （8）茉莉花渣多糖分离纯化：向茉莉花渣粗多糖中加入去离子水,加热溶解,过滤去除不溶物,得到茉莉花渣粗多糖溶液;采用超频震动膜过滤系统,将茉莉花渣粗多糖溶液分别过分子量（Mr）1000kD、500kD、300kD、100kD、50kD、30kD、10kD、3kD和650D滤膜,得到6份分子量不同的茉莉花渣多糖溶液。 3、技术的创造性与先进性 （1）本发明能够高效分离提纯不同分子量的茉莉花渣多糖,为后续的茉莉花渣多糖的发展提供基础研究。 （2）本发明中,在茉莉花渣进行提取前,先制备膨发性茉莉花渣粉末,通过低温高压爆破改变茉莉花渣粉末结构,使多糖物质从植物细胞内更快释放出来,提高有效成分的得率。同时该操作在低温下进行,避免了茉莉花渣多糖成分因热效应引起结构变化,避免降低多糖物质生物活性。 （4）本发明采用超频震动膜过滤分离茉莉花渣多糖,由于多糖结构的复杂性,其分离、纯化和生化分析难度较大,而且活性多糖一般属于大分子化合物,具有粘性,在膜分离过程中更容易产生膜污染和堵塞。本发明采用超频震动膜过滤分离茉莉花渣多糖,解决了分离纯化多糖中膜污染和膜堵塞的关键问题。 （5）本发明采用MTT比色法,分析在不同分子量的茉莉花渣多糖作用下的RAW264.7巨噬细胞活力,确定了茉莉花渣多糖具有调节免疫功能的特性,特别是Mr=100~500kD组,说明分子量Mr=100~500kD的茉莉花渣多糖是调节免疫力的关键有效组分。 4、技术的成熟程度,适用范围和安全性 本发明涉及植物提取技术领域,具体涉及茉莉花渣活性多糖的制备方法及其应用。 5、应用情况及存在的问题 （1）应用情况 无。 （2）存在问题 无。