[00132584]类风湿关节炎诊断新试剂盒的研发与应用

类风湿关节炎(RA)是一种以慢性关节炎症为特征的系统性自身免疫性疾病，目前尚无有效的治疗手段能够阻止和逆转该病的发展和病理损害，因而早期确诊、早期治疗是有效延缓疾病进程、减慢关节骨质破坏的关键。现已发现 RA 患者体内存在大量的自身抗体，如类风湿因子(RF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子(APF)和抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体等，这些抗体对于 RA 具有重要的辅助诊断价值。如 RF 早已被列入 RA 的分类标准之中，而抗 CCP 抗体在 RA 中具有较高的敏感性(60%～70%)和特异性(98%～99%),并对早期 RA 的诊断及预后有一定的指导意义。但是，仍有相当一部分 RA 患者这些抗体是阴性。因此，寻找新的具有高敏感性和特异性的临床检验指标对于 RA 的辅助诊断具有非常重要的价值和临床应用前景。 近年国内外大量的研究表明，蛋白质的瓜氨酸化(citrullination)作用可能在RA发病机制中具有重要意义。如已发现在RA滑膜内存在大量的瓜氨酸化蛋白,并证实这种瓜氨酸化蛋白主要为瓜氨酸化的纤维蛋白的 α 和 β 链。目前，在RA患者体内已发现多种瓜氨酸化的自身抗原，如丝聚蛋白(filaggrin)、波形蛋白(vimentin)、纤连蛋白(fibrinectin)和纤维蛋白原(fibrinogen)等，同时检测到患者血清中存在针对这些瓜氨酸化自身抗原的抗体。因而，对于这些抗瓜氨酸化蛋白的自身抗体的研究与开放，将对进一步理解 RA 的发病机制，辅助 RA的临床早期诊断有着重要的意义。 本项目主要为研发新的 RA 临床诊断指标，并实现临床检验试剂盒的商品化及推广。 (1)瓜氨酸化牛Ⅱ型胶原抗体的测定: 采用肽酰精氨酸脱亚氨基酶(PAD)将牛II型胶原(bCⅡ)进行瓜氨酸化，然后通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对不同风湿病患者血清中的抗瓜氨酸化 bCⅡ抗体水平进行测定，结果发现抗瓜氨酸化 bCⅡ抗体在RA中的敏感性为 50.3%，特异性为 89.9%。(2)瓜氨酸化纤维蛋白原抗体的测定: 采用 PAD 酶在体外将人纤维蛋白原(Fg) 进行瓜氨酸化，然后通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对不同风湿病患者血清中的抗瓜氨酸化 Fg 抗体(ACF)水平进行测定，结果发现 ACF 在 RA 中的敏感性为67.21%，特异性为 84.84%。而且该抗体与抗 CCP抗体具有较好的一致性。在 RF、AKA 和 APF 阴性的 RA 患者中，该抗体也具有较高的阳性率,分别为 38%、59%和68%。 因而这两种抗体的检测对 RA的辅助诊断具有很好的临床意义和应用价值。