[00129544]神经系统特别是中枢神经系统的显示和表征方法

简介 本发明涉及神经系统特别是中枢神经系统的显示和表征方法，该方法是同时通过金属浸渍和免疫细胞化学对组织切片本身进行染色。随后通过常规的光学显微术或者共聚焦激光扫描显微术，对经过双重标记的组织切片进行形态学分析、抗原分析和/或神经化学定性/定量分析。 与当前的组织学分析技术相比较，本发明方法可以克服不同的金属浸渍方法（特别是Golgi-Cox浸渍）与免疫组织化学之间的不相容性。本发明方法通过金属浸渍和免疫细胞化学对神经系统进行显示和表征，可以使得能够在操作简单、重现性高的单一方法中同时执行两种技术，从而可以使两种技术对神经组织形态结构的显示的作用得到放大，并获得两种技术之间的协同效应，实现通过常规的光学显微术或者共聚焦激光扫描显微术对同一组织学切片的分析。 本发明的方法是通过金属浸渍和免疫组织化学进行组合染色，对神经系统进行显示和表征，该方法包括以下步骤： 1．用含有浓度在1 – 4% (w/v)之间的多聚甲醛的水溶液固定神经组织样本； 2．对固定的组织样本进行金属浸渍； 3．用适合于所寻求的免疫组织化学染色的试剂处理金属浸渍组织的切片。 应用： 本发明的方法可应用于实验领域，以研究中枢神经系统中的神经元连接的特性； 共聚焦显微术； 生产试剂盒。 优点： 本发明方法的主要优点如下： 1．能最高程度地显示神经元的结构细节以及神经化学性质； 2．能用特异性抗体对抗原进行表征； 3．能分析神经元元件之间的解剖学相互作用； 4．可以采用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)和相应的3D重构和建模； 5．节省试验动物（目前的情况是需要分别实施所述两种技术，从而需要在不同的动物上实施）； 6．与传统技术相比，在节约时间和成本方面具有极大的优点，同时质量更高。 市场前景 本发明方法的应用对象是研究中枢神经系统的神经科学家、神经解剖学家和共聚焦显微镜师。 我们证实，在过去的十年里，大约有12.7万篇文献引用了Golgi方法。另外，已描述了Golgi方法的几种变型方法，并且过去还尝试过将Golgi方法与免疫过氧化物酶方法相结合。每种变型方法的关键点都在于所使用的定色剂混合物。这造成了极大的混乱，并由于制备困难，甚至还令人十分沮丧。此外，不能在大脑的所有区域中单独使用Golgi-Cox（因为难以区分细胞），而本发明方法则可以解决这个问题。 本发明方法能立即获得稳定且标准化的结果。可以使用本发明方法的混合物进行“简单”的Golgi-Cox染色，或者按需与免疫荧光相结合。预期经过进一步的研发，还可应用于中枢和外周神经系统疾病的诊断。另外，还有可能应用于肝脏、胰腺等器官的病理诊断。