[01267434]糖尿病诊断新指标1,5-脱水葡糖醇化学发光法检测试剂盒研制与评价

1，5-脱水葡萄糖醇（1，5-AG），又名2-脱氧葡萄糖、1，5-脱水山梨醇，血清1，5-AG的含量反应过去2～3天血糖控制水平，不受冶疗方法、性别、年龄、体重、患病时间和血清中1，5-AG起初的浓度影响，回升幅度明显大于常用的糖尿病诊断指标HbA1c和FA，可更灵敏、更确切地确切地反映较短期内糖尿病的控制程度。

由于1，5-AG测定对糖尿病的诊断有较好的特异性和灵敏度，在近20年中，测定方法得到不断开发和改进。主要有气液色谱法（GLC）、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱质谱法（LC-MS），这些方法需要对1，5-AG衍生和复杂的样品前处理，同时需特殊、昂贵仪器，不适合临床常规分析。

近几年来，利用酶测定1，5-AG方法得到了开发和改进，目前临床上主要应用GK-ROD酶偶联两点法，该法能实现1，5-AG的自动化检测，各项技术指标也能满足临床需要，但血清中葡萄糖等内源性物质干扰较明显。为消除这些干扰，常在试剂中引入葡萄糖激酶、丙酮酸激酶、抗坏血酸氧化酶等工具酶，由于酶制剂的不稳定性，重组后的液体试剂较难保存，只能以干粉形式提供，给临床实际应用带来了不便。

另外，由于糖尿病病人血清中1，5-AG含量显著降低，提高1，5-AG检测的灵敏度是发展新的匀相法检测技术的另一个重点。

临床迫切需要一种抗干扰强、易于保存、灵敏度高的液体型检测试剂盒用于血清1，5-AG的临床测定。

本项目通过对近中性条件下化学发光法测定微量过氧化氢的研究、1，5-AG酶法测定新技术的研究，分别建立了1，5-AG-6-P脱氢酶法、吡喃糖氧化酶法测定1，5-AG、化学发光法测定1，5-AG的新方法，其中1，5-AG-6-P脱氢酶法将葡萄糖（Glu）转化为葡萄糖-6-磷酸（G6P）的 酶法途径与ATP酶法再生系统相偶联、吡喃糖氧化酶法通过酶法途径将葡萄糖分解为磷酸二羟丙酮和3-磷酸甘油醛，特别适合采用吡喃糖氧化酶法的液体型化学发光法1，5-AG测定试剂制备;

系统性研究了项目涉及的葡萄糖激酶（GK）、1，5-AG-6-P脱氢酶法、丙酮酸激酶（PK）、抗坏血酸氧化酶（ASOD）、胆红素氧化酶（BOD）、吡喃糖氧化酶（PROD）、过氧化物酶（HRP）等物质在液体状态下储存所需实验条件;

开展了所研发的液体型1，5-AG测定试剂置2-8℃保存达12个月有效期的实验研究;

在此基础上研发了一种基于葡萄糖激酶（GK） -磷酸己糖异构酶（PGI）-6磷酸果糖激酶（PFK） - 果糖1，6二磷酸醛缩酶（FDA）-吡喃糖氧化酶（PROD）偶联的血清1，5-AG化学发光法检测新技术及液体型试剂盒产品并应用于临床，具有良好的社会效益和经济效益。