[01170373]新型腺病毒载体丙型肝炎疫苗制备

本项目构建了两种具有自主知识产权的新型腺病毒载体SAd23;以此制备了SAd23-HCV-E1E2及NS2-5B疫苗候选株;初步测定了疫苗免疫原性,进而为利用自主知识产权的HCV狨猴感染模型评价疫苗免疫保护效果,以及为临床试验提供了关键的理想的试验用HCV疫苗候选株与产品。目前大多数用于研发疫苗及基因治疗的基因运输载体都基于腺病毒5型。然而,人体中抗Ad5中和抗体的存在极大降低此型腺病毒疫苗的疗效。因此,本研究构建了可以避免人群中预存Ad5中和抗体的新型腺病毒载体：利用在人群中血清阳性率非常低的黑猩猩来源的腺病毒23型作为载体。成功构建了复制缺陷性腺病毒载体SAd23-Adbone。通过SAd23病毒基因组序列的酶切位点分析,将野生型的病毒SAd23的基因片段化连接至pNEB193载体上,在构建的过程中,删除E1和E3两部分,形成最后复制缺陷性腺病毒载体骨架质粒,接入外源基因,即可包装病毒。同时,为了提高新型腺病毒载体SAd23-Adbone在人源包装细胞株中的包装产量,对SAd23的开放阅读区ORF进行了改造,构建了完整质粒SAd23L,提高病毒包装与制备效率100倍以上,达到1011/ml,远远高于国内外同型腺病毒载体疫苗的病毒滴度,为大规模生产疫苗提供了有利条件。另外,经小鼠和狨猴测定研制的SAd23-HCV疫苗株的免疫原性,可以诱导动物产生强烈的HCV特异性细胞免疫反应,为进一步评价疫苗免疫保护效果奠定了基础。