[01132452]带P53基因的腺病毒对血管内膜剥脱后再狭窄的基因治疗

该课题中我们研究腺病介导的野生型P53基因在体外对VSMC增殖的抑制作用，并对其机制进行研究和分析，探讨基因治疗PTCA术后再狭窄的途径。　　在该研究中我们应用同源重组方法构建了介导野生型P53基因和报告基因LACZ转移的复制缺陷型重组腺病毒，经酶切，PCR共扩增，电镜等方法证明了构建病毒载体的正确性，重组病毒经繁殖、扩增和纯化后测得其滴度均高达pfu/ml以上，并证明这种腺病毒载体是具有高转染效率且安全可靠的基因转移系统。　　体外研究表明，腺病毒介导野生型P53基因能显著地抑制培养的VSMC的增殖，并且这种抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性，应用流式细胞计数仪，电镜和原位未端标记等技术对转染P53基因的VSMC进行检测分析，结果显示野生型P53能诱导体外培养的VSMC凋亡及明显的G1期阴滞。　　采用日本大耳兔髂动脉球囊操作模型进行的体内基因治疗实验证明，腺病毒介导的野生型P53基因能显著抑制血管内膜损伤后新生内膜的形成，使血管新生内膜面积和内膜与中膜的比例均明显减小，管腔狭窄程度明显减轻，这种抑制作用与野生型P53蛋白的大量表达及其引起的VSMC凋亡有关，实验动物的主要脏器未发现病理性改变。由此证明腺病毒介导的野生型P53基因转移对实验动物血管操作后内膜增殖的治疗有效的，安全的，可靠的。