[01119101]人胰高血糖素样肽-1类似物降血糖活性研究

本项目属于医药应用基础研究领域,是对人胰高血糖素样肽-1（human glucagon-like peptide-1,hGLP-1）类似物的降血糖活性进行研究并评估hGLP-1类似物在治疗糖尿病中的应用前景。采用定点突变技术和改进的小片段拼接技术,成功构建了hGLP-1类似物基因的新型载体。转化大肠杆菌BL21（DE3）,获取含hGLP-1类似物基因的工程菌株。通过IPTG诱导表达、GST柱亲和纯化和Thrombin酶切获得一定纯度的重组hGLP-1类似物前体。利用蛋白酶（CPD-Y）的转肽特性,选用亲核试剂和光敏试剂,在体外完成了前体蛋白的C末端酰胺化修饰。同时,构建了一种含hGLP-1类似物的新型基因治疗载体pIRES2-EGFP-2×Val2-hGLP-1。将制备的重组hGLP-1类似物以不同剂量口服给药,并与hGLP-1类似基因治疗进行比较,对其活性进行分析。实验结果表明,hGLP-1类似物可明显降低糖尿病大鼠的血糖水平、提高血清胰岛素水平,同时受损的胰岛组织也部分得到改善。提示：口服给药简便易行、效果较好,有望成为重组hGLP-1类似物用于治疗糖尿病的一种新方法。而且,hGLP-1类似物基因转染可能是临床治疗糖尿病的另一新途径。 本项目研究改变了国外常用的化学合成多肽方法,建立了基因工程制备重组hGLP-1类似物的技术路线,为适应于产业化规模生产提供了技术平台。该技术路线也为其它基因工程产品的制备提供了技术参考。特别是本研究所建立的hGLP-1类似物C末端酰胺化方法,不仅可弥补该领域研究的不足,而且也为其它基因工程产物或肽类的体外酰胺化提供技术路线,这是本研究一个重要的创新,有良好的应用前景。 本项目所获得的新型重组hGLP-1类似物,不仅可作为治疗药物更好应用于糖尿病的治疗,而且从长远考虑,相对于开发治疗糖尿病的药物,该重组产品的研制也可用于开发功能性保健品,不仅耗时短,费用低,而且市场前景更大。