[01101268]禽流感新型预防疫苗及诊断试剂盒的研发

1.任务来源：该项目“禽流感新型预防疫苗及诊断试剂盒的研发”(合同编号20065020)为吉林省科技发展计划项目-重大农业科技专项项目。2.应用领域和技术原理：(1)应用领域：畜禽养殖和动物疫病防控。(2)技术原理：该项目将传统实验技术(血凝、血凝抑制、琼脂扩散)与现代生物新技术(荧光RT-PCR、多重RT-PCR、分子克隆、基因重组、序列分析、克隆表达等)相结合，互为补充和利用，对禽流感的新型预防疫苗及诊断试剂盒进行研发。3.性能指标：(1)计划指标：①研制出安全有效的禽流感多价基因工程疫苗，可保护H5、H7、H9三个亚型的感染，疫苗免疫期8个月以上，近期保护率达95%以上。②研制出多联RT-PCR诊断禽流感试剂盒，可以直接确定禽流感病毒亚型，其敏感性特异性达95%以上。③国内外发表论文8篇。(2)完成指标①从吉林省各地区采集动物病毒分离材料中，分离得到禽流感病毒毒株20株。揭示了吉林省AIV流行特征。②根据H3.H9亚型抗原表位及其它主要抗原(NA，M，NP)表位基因设计并合成了流感病毒复合多表位基因盒。构建了重组鸡痘病毒疫苗，免疫期8个月，近期保护率达到100%。③建立了H5、H7和H9亚型AIV的三联RT-PCR诊断方法；组装成了诊断试剂盒。该试剂盒的敏感性强、特异性达到95%。④对禽流感病毒(AIV)NP基因进行修饰和改造，在大肠杆菌中实现了表达，在该基础上用纯化的NP蛋白建立了通用型禽流感ELISA诊断方法，制定了间接ELISA操作程序。⑤发表研究论文11篇。4.与国内外同类技术比较：该项目研究能够将传统的实验技术(血凝、血凝抑制、琼脂扩散)与现代生物新技术(荧光RT-PCR、多重RT-PCR、分子克隆、基因重组、序列分析、克隆表达等)相结合，互为补充和利用。与国内外同类研究相比，该项目具有如下创新之处，具体见“成果的创造性与先进性”。5.成果的创造性、先进性：通过吉林省科学技术情报研究所和吉林省卫生统计信息中心的国内外查新结果可知，该项目所获得的研究成果除该课题组成员的文献外，在国内外均未见相同或相似报道。与国内外相似研究相比，项目成果具有如下创新点。第一，项目率先在国内，以病原调查为主，对吉林省家禽和哺乳动物禽流感病毒感染状况进行调查。第二，项目在国内外，首次研制了H5、H7和H9亚型禽流感病毒的三联RT-PCR诊断试剂盒。第三，以优势流行株为研究对象，克隆其主要相关抗原基因，建立病原储备库和基因储备库。第四，应用真核表达载体和各种辅助因子，研制禽流感的多价新型核酸疫苗和基因工程重组活载体疫苗。开展基因工程新型疫苗制剂的安全评价、制备工艺、检验规程等临床应用前研究和规模化现场试验。项目所获成果可在吉林省各市、县、乡、村的家禽养殖户中进行推广和使用，也可在吉林省各兽医行政部门中推广。